細菌検査コミュの教えてください

食品メーカーで品質管理をしています

微生物関係は少し苦手です

ところで培地はなぜ反転させて培養させるのでしょうか

また培地を溶解した後

浴槽内で60℃くらいで加温していますが

高すぎると言われましたが

やはり高すぎるのでしょうか

滅菌や溶解でもっと高い温度になっているのですが

コメント(20)

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[1] mixiユーザー 09月04日 09:46

反転させるのは、万が一シャーレが空いてしまったときでも、
・落下細菌が入らないようにするため。
・釣り菌等シャーレを開くときも、真上を向けないで実験者の正面に開けるため。

「混希培養をしている。そしてシャーレに注ぐ」の温度であれば高いです。
「素手」一歩譲ってもは「軍手１枚」で三角フラスコをずっと持っていられる温度でないと、低温細菌など温度に敏感な菌が死んでしまいます。

・・・と昔学校で注意を受けました。

[2] mixiユーザー 09月04日 09:59

倒立させる理由は乾燥を防ぐため、またｺﾝﾀﾐを避けるためです。(倒立させることにより上の方が重くなるので、シャーレがより密着する)

混釈法を仮定としてお話ししますと、やはり60℃では、ちょっと高いように感じます。
溶解・滅菌は高温になりますがその後ウォーターバスで50℃前後にします。
それ以上の温度ですと試料・検体中の菌が損傷を受け発育しなかったりして正しい細菌数が測定できない可能性があります。
また、それ以下の温度ですと培地の分注途中に固まってきてしまいます。(大体寒天は40℃位で固まってきます)

[3] mixiユーザー 09月04日 12:06

理由は上記の通りだと思いますので割愛します。

弊社の場合、混釈培養で標準寒天なら50℃前後(可能な限り50℃以下)、
デソは50℃以下と規定しています。

ウォーターバスと放射温度計で温度管理をしています。

[4] mixiユーザー 09月04日 15:35

上記のかたがたが大方の回答をしてしまったので。。。

豆知識？
滅菌ごの培地をゆっくり冷やした場合と、急冷した場合で、培地内の溶存酸素量が異なるのだそうです。急冷したほうが溶存酸素が少なくなるそうです。
普通に好気的培養ならば関係ありませんが、嫌気培養やE/Oテストの場合は差がでるそうです。

[5] mixiユーザー 09月04日 19:27

解りやすいご回答ありがとうございます

ウォーターバスは60℃で

45℃程度まで

冷やしてシャーレに流していましたが

60℃で加温していると培地が失活してしまうということを言われました

[6] mixiユーザー 09月04日 20:38

「６０℃で加温していると失活する」は、選択培地でしょうか？
なんの培地なのか差し支えなければ、教えていただきませんか？

[7] mixiユーザー 09月04日 20:54

使用培地は一般細菌用SPC培地

酵母・かび用培地(弊社オリジナル培地)

大腸菌群用ﾃﾞｿｵｷｼｺﾚｰﾄ培地

乳酸菌用BCP培地です

[8] mixiユーザー 09月05日 07:10

くどくてごめんなさいね。（食品衛生から離れて随分経つんで）
一般生菌数用のＳＰＣ培地って、普通寒天培地か標準寒天培地とは違うんですか？
酵母・かび用培地はポテトデキストロース寒天培地ではなくて、特別処方なんですね。（オリジナル処方は社外秘ですものね）。
何の成分が６０℃で加温する（し続ける）事によって失活してしまうんでしょう。
言われた方に聞いてみるといいかと思います。
で、分かったらココに書き込んでくれるとうれしいです。

[9] mixiユーザー 09月05日 19:40

保温は55℃以下でお願いします

と言われたのですが

なぜかは聞けませんでした

微生物のセミナーでした

機会があれば聴いてみます

[10] mixiユーザー 09月05日 22:45

何となくデソキシコレート培地がそれに当たるのではないかと思います。
この培地だけ、作成が滅菌ではなく溶解だと思いますので。
長時間高温にしておくと、確か胆汁酸塩が壊れるのでは…？

シャーレを伏せるのは、他の方が書かれた理由がほとんどですが
追加するなら、表向きだと蓋に湿気がたまって水滴が出来て
それが培地表面に落下する、という危険も回避できるから、というものあります。

[11] mixiユーザー 09月06日 07:23

確かにデソキシコレート培地は溶解だけですよね。
ここからは記憶なんで間違っていたらごめんなさい。「沸騰水浴で溶解する溶解時間は１時間以内」ってラベル表示だったような。それが、実はまだ続いているんですね。。。。

あと、クッキーさんにお勧め（？）
セミナーに参加したら、セミナーの先生と必ず名刺交換をしておきましょう。
意外といい人が多くて、セミナー後もメールで色々と質問したりすると、丁寧に指導してくれます。
セミナー代金の元が、ばっちりとれますよ。

[12] mixiユーザー 09月09日 22:05

役に立つ情報か分かりませんが、
以前、会社の先輩がデソキシコレート寒天培地の検討をしていました。

使用菌株が何だったか？については調べないと分からないのですが、
菌液をデソキシコレート培地で混釈して培養します。
デソキシコレート培地は調製直後のものと数時間50℃の水槽で保管したものの二種類。
長時間保管した培地を使用した方が、調製直後のものより
培養後のコロニーが少なかったという報告がありました。

それからはデソキシコレートの長時間の高温保管は辞める方向です。

[13] mixiユーザー 09月13日 10:01

みゆさん。貴重な実験情報ありがとうございます。
その先輩は論文発表されていたら、取り寄せて読んでみたいです。（今、ＪＩＣＳＴにアクセスできない部署で残念。）

デソキシコレート寒天培地は、沸騰水浴場で溶解が確認されたら、流水で冷却して即使用・・・というのが１番大腸菌郡達にとって、居心地がよろしいって感じなんですね。
食品衛生だと検査する方としては、コロニーが検出されない方が、いいですけどね（笑）
基本的な事の中に色々な情報エッセンスが満載ですね。
微生物検査ってこういう所で、「なぜ？」を持つと楽しみが増してくると思います。

[14] mixiユーザー 09月15日 21:20

〉〉みゆさん
長時間というのは何時間くらいでしょうかその他回答してくださっ皆さんありがとうございます

[16] mixiユーザー 01月18日 08:54

あ、久しぶりに見たら、
質問が…。
すいません。
明日にでも会社でデータ調べてきます！

[17] mixiユーザー 01月19日 20:02

培地の保温時間のデータは見つからず…
代わりに加熱時間の検討データをちょっと紹介します(申し訳ないです)

デソキシコレートを煮とかすのにかける時間を
通常の30、60…240分、あとオートクレーブかけてみた時の
菌数への影響を検討された先輩がいらっしゃいました。
(あくまで内部データなのですが)

菌株を直接混釈した場合に、
大腸菌を始めとする大腸菌群への影響はほとんどありませんでしたが、
大腸菌群以外の菌種なのに、加熱時間を長くすると、コロニーが白色→赤色に変色する傾向がある菌がありました。

あと、菌液ではなく、市販の汚染試料をデソで混釈したところ、
加熱時間が長くなるに従って、検出される赤色コロニーの数が減る傾向がある試料がありました。
多いもので3オーダー程度の減少が認められました。

社内データなので、詳細までは紹介できません。
興味をお持ちの方は是非やってみてください

ちなみに影響がある菌株、試料があるということがわかったので、
これ以降、加熱時間はしっかり守っています。

保温時間の検討は…興味をお持ちの方は是非データをとって見てください！
(申し訳ないです)

[19] mixiユーザー 01月21日 18:32

コロニー色の変化に関しては、まさにその通りです

。
デソに生育できる菌が、コロニー色で本来は選別できるものが、
できにくくなってくるということです。

試料は生肉等にそのような変化が認められたものがありましたが、
あくまで社内データで
『影響がでる試料があることがわかった。だから、加熱時間を守りましょう！』
というレベルなので、
そこまで大量の試料については検討してません。

[20] mixiユーザー 01月21日 18:34

追記

デソのメーカーによって異なるとは思います。

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