はじめまして。
今、いろいろな品種の米のタンパク質を分析をしています。
米の品種間でのタンパク質組成の違いをデータでまとめたいと考えています。
そのため、タンパク質の分析に、SDS-PAGEという電気泳動法を行っているのですが、
米に含まれるタンパク質の１つであるα-グロブリンがどうしても検出できません。
本来は26kDaにバンドが出るはずなのに、どの品種の米をやっても出ません。
操作等のどこかに誤りがあるかと思いますが、いくら調べても分かりません。
分析に詳しい方がおりましたらアドバイスを頂けないでしょうか。
今、行っているやり方は、
? 米を粉砕機で粉砕する。
? 米粉から抽出溶媒（４％SDS、125mM Tris-HCL[pH 6.8]、８Ｍ尿素、２０％グリセリン、５％ ２-ＭＥ） で抽出を行う。
? 15000rpm、１５分間、室温で遠心分離して上清を採取。
? ９０℃５分間加熱。
? ゲルのウェルにサンプル１０μＬをアプライ。
? ＣＢＢで４０分間染色後、脱イオン水で脱色。
この方法でα-グロブリンが出ません。
もし何かご指摘頂ける方がいらっしゃいましたらよろしくお願いします。
今、いろいろな品種の米のタンパク質を分析をしています。
米の品種間でのタンパク質組成の違いをデータでまとめたいと考えています。
そのため、タンパク質の分析に、SDS-PAGEという電気泳動法を行っているのですが、
米に含まれるタンパク質の１つであるα-グロブリンがどうしても検出できません。
本来は26kDaにバンドが出るはずなのに、どの品種の米をやっても出ません。
操作等のどこかに誤りがあるかと思いますが、いくら調べても分かりません。
分析に詳しい方がおりましたらアドバイスを頂けないでしょうか。
今、行っているやり方は、
? 米を粉砕機で粉砕する。
? 米粉から抽出溶媒（４％SDS、125mM Tris-HCL[pH 6.8]、８Ｍ尿素、２０％グリセリン、５％ ２-ＭＥ） で抽出を行う。
? 15000rpm、１５分間、室温で遠心分離して上清を採取。
? ９０℃５分間加熱。
? ゲルのウェルにサンプル１０μＬをアプライ。
? ＣＢＢで４０分間染色後、脱イオン水で脱色。
この方法でα-グロブリンが出ません。
もし何かご指摘頂ける方がいらっしゃいましたらよろしくお願いします。
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