シロイヌナズナコミュの形質転換の培地について

減圧浸潤法でシロイヌナズナに遺伝子導入しようとしていますが，浸潤用の培地が，MES Bufferを加えると濁ってしまいます．

以前はそんなことなかったと思うのですが，こういう経験のある方いますか？

原因が分からないし，何か沈殿しているものが影響しないとは限りませんし，かなり不安です．

何かご存じの方，教えて下さい．

コメント(3)

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[1] mixiユーザー 10月05日 16:45

減圧浸潤法は以前やったことがあります。
浸潤用培地は多少濁った様に記憶しています。
でも、かなり昔なのではっきりとは覚えていません。

どうしても沈殿が気になるのであれば、減圧浸潤法をやめて
フローラルディップ法を試してみるのをお勧めします。

こちらの方が効率も高いし、浸潤用培地の組成が簡単ですので。
（確か10%スクロース、0.05%SilwetL-77だった気がします。）

[2] mixiユーザー 10月05日 19:06

＞TKGさん
コメントありがとうございます。
減圧浸潤も、フローラルディップも、培地自体の組成はあまり変わらないと思います。このトピックをたててからすぐ、pH調整に使うMES/KOHを作り直して培地を作ったところ、濁らなくなりました。
でも、なぜMES/KOHの作り方を変えてないのに、濁ったり濁らなくなるのかわからないんですけど。。。
とりあえずよくわからないんですけど解決しました。ありがとうございます。

[3] mixiユーザー 10月05日 19:56

解決してたみたいですね。よかったです。

減圧浸潤法とはなかなか渋いですね。最近はフローラルディップがナズナではスタンダードだと思います。昔やった時は効率が0.05%もなかった気がします。ちなみに今はフローラルディップ使ってますけど、1%くらいの効率が出てるのでめちゃ楽です。

形質転換体の作出は結構面倒だと思いますが、頑張ってください。

ちなみに私は作りすぎて死にかけです。