ＩＢＯＯＢ/ＯＧ交流会コミュの微生物（繊毛虫

ゾウリムシTritonX-100抽出モデル
→学生実験ときのプロトコルを翻訳してコピーで載せておきます。

材料；ゾウリムシ（Paramecium caudatum）、標準溶液、刺激駅
試薬；Triton X-100、KCl、3K-EDTA、Tris、Maleic acid、ATP、MgCl2、EGTA、NaOH
機材；アイスクーラー、試験管立て、手回し遠心器、遠沈管、ピペット、ピペットマン、pHメーター、デプレッションスライド、実体顕微鏡、氷

方法
１．遠心と洗浄
　液体培地を遠心管に入れ、遠心をおこなったのち培地を取り除き、Washing medium（1 mM CaCl2, 4mM KCl, 1mM Tris（pH 7.2））に置き換える。

２．再び遠心をおこない、Extraction medium（0.01% Triton X-100, 20 mM KCl, 10 mM 3K-EDTA, 10 mM Tris-maleate buffer（pH 7.0））に置き換えて氷上で３０分静置する。

３．“静かに”遠心をおこなったのち溶液を取り除き、Washing medium（50 mM KCl, 10 mM Tris-maleate buffer（pH 7.0））に置き換える。
→３回繰り返す

４．再活性化液（A, B, C）に置き換える

再活性化液A
ATP 4 mM
MgCl2 4 mM
EGTA 3 mM
KCl 50 mM
Tris-maleate buffer 10 mM（pH 7.0）

再活性化液B
ATP 4 mM
MgCl2 4 mM
CaCl2 10 µM
KCl 50 mM
Tris-maleate buffer 10 mM（pH 7.0）

再活性化液C
ATP 0 mM
MgCl2 4 mM
CaCl2 10 µM
KCl 50 mM
Tris-maleate buffer 10 mM（pH 7.0）