ログインしてさらにmixiを楽しもう

コメントを投稿して情報交換!
更新通知を受け取って、最新情報をゲット!

透過型電子顕微鏡友の会コミュのマトリゲル上で培養された細胞の包埋

  • mixiチェック
  • このエントリーをはてなブックマークに追加
いつも拝見させていただき、とても勉強になります。

電顕技術支援をしている者なのですが、最近マトリゲル上に培養された細胞塊やネットワークを構築した細胞集団の電顕試料作成依頼があり、包埋の時点で難儀しています。

24-wellをマトリゲルでコートし、その上に培養した細胞をアルデヒド・オスミウムで固定し、
酢酸ウランによるブロック染色の後にEtOH脱水して、
Quetol812に置換し、60℃で2日以上重合させているのですが、
肝心のマトリゲルの部分だけ柔らかいままになってしまいます。
糸鋸で切り出し、ウェル底面のスチロール部を外そうとすると、硬いスチロールと重合した樹脂で
柔らかい羊羹を挟んだように マトリゲルの部分だけぐにゃぐにゃのままになってしまいました。
重合が進まないというよりも、樹脂への置換が進んでいないような感触です。
細胞はマトリゲルの中にもぐりこんでいるので、ここの層が固まってくれないと薄切できなくて困っております。

1%アガロースに入った細胞のときには問題なく樹脂に置換できたので、マトリゲルでも同様に樹脂置換できるものと思っていたのですが、甘く観てしまっていたようですorz
脱水・置換のプロセスも、通常の培養細胞のときよりも液交換の回数を増やしてじっくりと置換していったつもりだったのですが、うーん。。。

また、樹脂との相性もあるのかと、手持ちのTAAB社のエポンを使ってみましたら、
今度はディッシュとの相性が悪く、スチロールが解けて白く濁ってしまいました。
LR-wthiteも同様に樹脂を溶かしてしまうことがわかっているので、この系には使えなさそうです。

ご経験のある方、アドバイスをお願いいたします(TT)

コメント(0)

mixiユーザー
ログインしてコメントしよう!

透過型電子顕微鏡友の会 更新情報

透過型電子顕微鏡友の会のメンバーはこんなコミュニティにも参加しています

星印の数は、共通して参加しているメンバーが多いほど増えます。