プロトコル　～究極　対　至高～コミュのRACEについて

RACEで遺伝子単離にチャレンジしてるんだけど
こんな事って出来ないかな？

１、RNAをPoly TでRTする。
２、1st strand cDNAにTerminal Deoxynucleotydyl Tranceferaseで3'側にPoly C鎖を付加。
３、Universal Primer+(G)17とUniversal Primer+(T)17でPCR

これでPolyA Tail(+)のRNAがバルクで増殖できる
これを大量に取っておく。

４、Universal PrimerとGene Specific PrimerでPCRする事により、cDNAの未知配列をGETする。必要ならネストもする。

なんか遺伝子ごとに一々RACEやるのめんどくさくてさ、こんな事考えてみたんだけど。
誰かもう既にやった事ある人とかいる？
若しくはもっと上手い方法知ってる？

コメント(3)

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[2] mixiユーザー 02月28日 18:55

InvitorogenのRACE kitならもうちょい簡単ですよ。

1．mRNAの5'のcap外してRNAアダプターを付ける。
2．逆転写(Oligo dTプライマーにはアダプターついてる)
3．5'、3'のアダプタープライマーでPCR

これで上記の目的のバルクcDNAライブラリーができますね。
あとは適当にgene specificプライマー使えば5'、3'のRACEができて、そのままcDNAクローニングできますね。

どうでしょう？

[3] mixiユーザー 02月28日 20:35

サンキューです！
Invitorogenのカタログ見てもイマイチぴんとこなかったのですが
ようやく原理理解できました。

なにより完全長のライブラリーが得られるというのが魅力ですね。
ボスと相談してみます。

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