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ABI PRISM 3100コミュのトラブルシューティング

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なんかトラブったら書きこんでみてください。

解決策があるかもしれないです。

呼ぶと10万円のABIの人を呼ぶ前に!!

たいていは呼ぶことになりますが。。。

コメント(3)

ん〜俺の場合
PCRでばっちり増えたらキアゲンKitでPCR産物を精製して5μlでアガロースゲル泳動してバンドを確認。

反応はBig Dye Terminator Vr3を使用
DNA 1μl(バンドがばっちりなら精製物を2倍希釈して1μl)
水 5.5μl
Primer(0.8pmol/μl) 2μl
5×Seq Buffer 1μl
BDT 0.5μl

のtotal 10μlで反応をかける

精製はエタノール沈殿
95%エタノール:水=4:1を50μl
に反応物10μlを入れピペッティングし、15min静置
12,000rpmで20min遠心
上層を除去(沈査は見えない)
70%エタノールを50μl入れ、軽くタッピング
12,000rpmで5min遠心
上層を除去(沈査は見えない)
室温でエタノールが乾くまで乾燥(20min位)

ハイダイホルムアミド 25μl入れシークエンスかける
って感じです。

失敗はほぼないです。PCRさえばっちりなら。

200bpならDNA量はかなり少なくて良いと思います。
昔はしっかりDNA濃度を測ってましたが、最近は目の方が正確なので、感覚でやってます。

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